副猪嗜血杆菌lgtF基因缺失株的构建及其部分生物学特性

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.11.019

摘要/Abstract

摘要：

lgtF基因编码的葡萄糖基转移酶在脂寡糖（LOS）的合成过程中负责增加一个葡萄糖合成庚糖I，在部分革兰阴性菌中是重要的毒力相关基因，但lgtF基因在副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPS）中的作用还不清楚。本研究利用遗传操作方法构建HPS SC096的lgtF基因缺失株（ΔlgtF）。通过热酚法分别提取缺失株与野生株的LOS，将提取的LOS进行SDS-PAGE和银染。比较缺失株与野生株的生长曲线、抗血清中补体杀菌能力以及对宿主细胞——猪血管内皮细胞（PUVEC）和猪肾上皮细胞（PK-15）的黏附和入侵能力。结果表明与野生株相比，ΔlgtF的LOS糖链结构变短，生长速度稍微减慢，另外，ΔlgtF在兔和猪血清中抗补体杀菌能力明显降低（P<0.05），对PUVEC和PK-15细胞的黏附入侵能力明显降低（P<0.05）。以上结果表明lgtF基因是HPS的一个毒力相关基因。

Abstract:

The lgtF encodes a glucosyltransferase responsible for adding a glucose to get heptose I in the synthesis of Lipooligosaccharide （LOS）.The lgtF gene is an important virulence-associated gene in some Gram-negative bacteria.However，the function of lgtF gene in Haemophilus parasuis was still unknown.We constructed an ΔlgtF mutant （ΔlgtF） of H.parasuis SC096 using a natural transformation system.The LOS of H.parasuis SC096 strain，ΔlgtF mutant was extracted by the hot phenol-water method.The LOS was addressed by SDS-PAGE and sliver stain.The growth curve，Serum resistance activity，adhesion and invasion ability in porcine kidney epithelial cells （PK-15） and porcine umbilical vein endothelial cells （PUVEC） of wild type SC096 and ΔlgtF mutant were measured.Compared to the wild-type SC096 strain，the ΔlgtF mutant exhibited obvious truncation of LOS structure and slight growth defect.Furthermore，the mutant had a greater sensitivity to the bactericidal action of porcine and rabbit serum （P<0.05），and displayed a significantly reduced ability to adhere to and invade PK-15 and PUVEC （P<0.05）.The above findings suggested that the lgtF gene is a virulence-associated gene of the H.parasuis SC096 strain.

中图分类号:

S852.613

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